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      ELISA實驗中出現假陽性結果和假陰性結果的原因

      發布時間: 2023-10-17  點擊次數: 300次

      ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。除了盒子本身質量外,操作中很多因素都影響試驗的正常結果。*常出現的問題是顯色淡,靈敏度偏低、重復性不佳、假陽性結果和假陰性結果,不管出現什么樣的結果,不但浪費客戶的金錢、樣本、精力,更重要的是對臨床做出了危險判斷。在這里我們分析ELISA試驗非正常檢測結果產生的常見原因,并探討其解決辦法,以提高檢測質量。

      1. 標本的采集與保存

      當標本采集保存不當產生溶血時,紅細胞中的血紅蛋白釋放到血清中,血紅蛋白具有過氧化物酶的性質,其通過吸附或“PP效應"

      (蛋白質間相互吸附的現象)結合后,可催化、B液顯色而造成假陽性標本采集保存不當致細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,會產生假陽性反應;標本在冰箱中保存時間過長導致血清IgG聚合,易使間接法的試驗本底加深。因此,標本宜在新鮮時檢測。

      反復凍融血清會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存做多次檢測,宜少里分裝凍存。

      2.加樣

      如果ELISA試驗樣品稀釋液少加或血清多加,都會引起本底增高。對于間接法來說,受上述兩個因索影響更大。因為血清中受檢的特異性IgG只占IgG中的一小部分。IgG的吸附性很強,非特異性IgG可直接吸附到固相載體上,有時也可吸附到包被抗原的夫面。這些非特異性的IgG均可以和酶標二抗發生反應而造成較高陰性本底或假陽性。如果加入的血清過多,高于規定的稀釋倍數,極易造成高值陰性。反之,造成假陰性。


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